Введение. Car-T-клеточная терапия является современным перспективным методом в лечении онкологических заболеваний. На сегодняшний день управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США одобрено шесть препаратов для клеточной иммунотерапии онкологических заболеваний крови. Однако отсутствует информация о доклинических испытаниях данных биомедицинских клеточных продуктов, так как используемые в них Т-клетки, несущие химерный антигенный рецептор, являются аутологичными для человека, что представляет проблему для применения к ним классических токсикологических тестов. Кроме того, это ставит под сомнение безопасность данных лекарственных средств, поэтому разрабатываются различные стратегии доклинических исследований, которые позволили бы преодолеть вышеуказанные проблемы и создать адекватные тест-системы с терапевтической мишенью. Цель исследования — оценка острой токсичности противоопухолевого препарата на основе генетически модифицированных T/NK-клеток, экспрессирующих химерный Т-клеточный рецептор против антигена HER2, на иммунодефицитных мышах линии BALB/c Nude. Материал и методы. Опытная и контрольная группы включали 5 самцов и 5 самок. Тестируемый препарат, а также носитель (растворитель-криоконсервант) животным вводили однократно внутривенно или внутрибрюшинно, в объеме 0,2 мл/животное. Опытным животным исследуемый препарат вводили в двух дозах: 0,5 • 10⁶ клеток/животное, эквипотенциальной терапевтической дозе для человека, и 5 • 10⁶ клеток/животное, в 10 раз превышающей терапевтическую дозу. В ходе исследования у животных регистрировали вес тела, потребление корма и проявление клинических признаков токсичности исследуемого препарата. На 15-й день исследования животные были подвергнуты эвтаназии и некропсии с осмотром макроповреждений органов, их взвешиванием и фиксацией. С целью выявления токсического действия тестируемого биомедицинского клеточного продукта проводили гистологический анализ. Результаты. Установлено, что однократное внутривенное или внутрибрюшинное введение биомедицинского продукта «анти-HER2-CAR-T/CAR-NK» в дозе, эквивалентной терапевтической для человека, а также в 10 раз превышающей терапевтическую, является безопасным для мышей BALB/c Nude. Проведённое доклиническое исследование продемонстрировало отсутствие значимых токсических эффектов. Ограничения исследования. Исследование выполнено на иммунодефицитных мышах линии BALB/c Nude, поскольку исследуемый продукт содержал живые чужеродные клетки. Заключение. Данная работа может стать основой для создания протокола по доклиническим испытаниям биомедицинских клеточных продуктов, полученных с помощью CAR- технологий. Соблюдение этических стандартов. Все манипуляции с животными проводили в соответствии с Протоколом-заявкой на животных, рассмотренным и одобренным «Институтской комиссией по контролю за содержанием и использованием лабораторных животных» ФИБХ РАН. Участие авторов:Горячева Н.А., Бондаренко Д.А., Ржевский Д.И., Слащева Г.А., Новикова Н.И., Дьяченко И.А., Мурашев А.Н. — сбор и обработка материала, сбор данных литературы, написание текста; Ржевский Д.И. — обработка материала и...

Epidermal stem cells (EpSCs) with high expression of regulatory factor Nanog can promote wound healing. The aim of the present study was to investigate the effectiveness and mechanism of epidermal stem cells (EpSCs) in healing scalds and the underlying molecular mechanism. Mouse EpSCs were isolated from skin tissues and cultured in vitro. First, the proliferative ability of EpSCs was determined via the upregulation and downregulation of Nanog expression levels in EpSCs using the MTS‑assay. Second, a wound healing assay of the EpSCs with different Nanog expression levels was performed to investigate cell migratory capacities. Third, the protein expression levels of various proteins in EpSCs with Nanog overexpression or knockdown, were determined. Finally, the transfected EpSCs were applied to the rat scald model to observe their effect on scald healing. Subsequently, wound scores, re‑epithelialization and capillary density were determined histologically. The results demonstrated that Nanog overexpression enhanced the proliferative ability of EpSCs via cellular (c)‑Myc. Moreover, the LV‑Nanog group of EpSCs with increased Nanog expression levels exhibited improved healing abilities in the wound healing test than control group. Using western blotting, it was demonstrated that EpSCs that were transfected with a Nanog‑overexpression vector expressed high Nanog protein expression levels, whereas small interfering RNA‑Nanog‑transfected EpSCs exhibited low Nanog protein expression levels. Furthermore, c‑Myc expression was synchronized with Nanog expression. It was also revealed that as the expression levels of c‑Myc increased, p53 expression levels also increased. In the rat scald model, Nanog‑overexpressing EpSCs enhanced wound closure and re‑epithelialization. The EpSCs with Nanog knockdown exhibited the opposite effects. The present study therefore indicated that Nanog may have a positive effect on scald healing in rats, which supports its use in EpSC‑based treatments against scalds. Furthermore, it was suggested that c‑Myc potentially serves a key role in this process and that this process avoids cancerization by relying on the supervision of p53.

The prognosis and quality of life of HER2 breast cancer patients have significantly improved due to the crucial clinical benefit of various anti-HER2 targeted therapies. However, HER2 tumors can possess or develop several resistance mechanisms to these treatments, thus leaving patients with a limited set of additional therapeutic options. Fortunately, to overcome this problem, in recent years, multiple different and complementary approaches have been developed (such as antibody–drug conjugates (ADCs)) that are in clinical or preclinical stages. In this review, we focus on emerging strategies other than on ADCs that are either aimed at directly target the HER2 receptor (i.e., novel tyrosine kinase inhibitors) or subsequent intracellular signaling (e.g., PI3K/AKT/mTOR, CDK4/6 inhibitors, etc.), as well as on innovative approaches designed to attack other potential tumor weaknesses (such as immunotherapy, autophagy blockade, or targeting of other genes within the HER2 amplicon). Moreover, relevant technical advances such as anti-HER2 nanotherapies and immunotoxins are also discussed. In brief, this review summarizes the impact of novel therapeutic approaches on current and future clinical management of aggressive HER2 breast tumors.

In recent decades, a new method of cellular immunotherapy was introduced based on engineering and empowering the immune effector cells. In this type of immunotherapy, the immune effector cells are equipped with chimeric antigen receptor (CAR) to specifically target cancer cells. In much of the trials and experiments, CAR-modified T cell immunotherapy has achieved very promising therapeutic results in the treatment of some types of cancers and infectious diseases. However, there are also some considerable drawbacks in the clinical application of CAR-T cells although much effort is in progress to rectify the issues. In some conditions, CAR-T cells initiate over-activated and strong immune responses, therefore, causing unexpected side-effects such as systemic cytokine toxicity (i.e., cytokine release syndrome), neurotoxicity, on-target, off-tumor toxicity, and graft-versus-host disease (GvHD). To overcome these limitations in CAR-T cell immunotherapy, NK cells as an alternative source of immune effector cells have been utilized for CAR-engineering. Natural killer cells are key players of the innate immune system that can destroy virus-infected cells, tumor cells, or other aberrant cells with their efficient recognizing capability. Compared to T cells, CAR-transduced NK cells (CAR-NK) have several advantages, such as safety in clinical use, non-MHC-restricted recognition of tumor cells, and renewable and easy cell sources for their preparation. In this review, we will discuss the recent preclinical and clinical studies, different sources of NK cells, transduction methods, possible limitations and challenges, and clinical considerations.