Практические рекомендации по взятию проб венозной крови для лабораторных исследований. От имени Комитета по преаналитике РФЛМ. Окончательная версия утверждена РФЛМ 02.04.21. Москва 2021.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Оценить возможность прогнозирования наличия транслокации t(12;21)(p13;q22)/ETV6::RUNX1 методом проточной цитометрии с использованием антигенов CD27 и CD44 у детей с острым лимфобластным лейкозом из B-линейных предшественников (ВП-ОЛЛ). МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В исследование вошло 437 случаев ВП-ОЛЛ у детей в возрасте от 1 до 18 лет. Процентное количество CD27 и CD44 позитивных опухолевых клеток, а также средняя интенсивность флуоресценции (MFI) были сопоставлены с результатами молекулярно-генетических методов исследования. Оптимизация порогового уровня для определения позитивной экспрессии антигенов CD27 и CD44 была проведена с помощью ROC-анализа. РЕЗУЛЬТАТЫ Было доказано, что транслокация t(12;21)(p13;q22)/ETV6::RUNX1 ассоциирована с сочетанием позитивной экспрессии CD27 и сниженной, либо отсутствующей экспрессией CD44. Тем не менее, оптимальными пороговыми уровнями для определения позитивной экспрессии CD27 и CD44 в процентах оказались 80,7 и 86,1% соответственно. Использование отношения MFI CD27 к MFI CD44 показало наиболее высокий параметр диагностического отношения шансов — 953,1. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Использование сочетания антигенов CD27 и CD44 позволило с высокой диагностической эффективностью предсказывать наличие t(12;21)(p13;q22)/ETV6::RUNX1 при ВП-ОЛЛ у детей методом проточной цитометрии.

При оценке результатов лабораторного исследования врачи зависят от популяционных референтных интервалов (попРИ, popRI). Наличие персонифицированных референтных интервалов (прРИ, prRI) может служить средством для упрощения интерпретации результатов лабораторного тестирования для каждого индивидуума. прРИ можно рассчитать, используя значения биологической и аналитической вариации и имеющиеся результаты исследований, полученные при рутинном выполнении. В данной статье изложены статистические подходы и логика, необходимые при создании и внедрении прРИ в клиническую практику. Для оценки гомеостатической точки, до использования результатов предыдущих тестов, необходимо оценить качество данных, включая анализ выбросов и тенденций. Для вычисления пределов прРИ, могут быть применены две различные статистические модели, основанные на «интервалах прогнозирования». В первой модели используется оценка персонифицированной внутрииндивидуальной биологической вариации. При использовании этой модели требуется как минимум пять предыдущих результатов тестирования для создания прРИ. Вторая модель основана на оценке внутрииндивидуальной биологической вариации, которая представляет собой среднюю оценку по популяции и может быть найдена для большинства измеряемых величин в базе данных биологической вариации EFLM. Эту модель можно применять и в том случае, если необходимое количество результатов предыдущих измерений не набрано. Благодаря использованию прРИ возникает возможность улучшить интерпретацию результатов тестирования отдельных лиц, хотя для демонстрации и оценки клинической значимости этого инструмента необходимы дополнительные исследования. Мы рекомендуем включать в лабораторные отчеты как попРИ, так и прРИ, чтобы помочь в оценке результатов лабораторных тестов при последующем наблюдении за пациентами.

Измерение — основа медицинской практики, и лабораторные исследования приобретают все большее значение для обоснования клинических решений и ведения пациентов. Большая часть неопределенности в лабораторных измерениях не может быть полностью устранена, даже если аналитическая невоспроизводимость и смещение сведены к минимуму, — из-за биологической вариации. Поэтому, как утверждают J.P. McCormack и D.T. Holmes, «неопределенность в лабораторных измерениях — это не решаемая, а только познаваемая проблема». Тем не менее клинические лаборатории со временем разработали, улучшили и внедрили в повседневную практику арсенал подходов, включая эксперименты по верификации и ежедневные процедуры контроля качества, для обеспечения точных и согласованных результатов. В последнее десятилетие были предприняты усилия для обеспечения того, чтобы аналитические характеристики (APC) действительно соответствовали аналитическим требованиям (APS), которые подходят для конкретного предполагаемого использования конкретной измеряемой величины в клинической практике. Мониторинг неопределенности измерения (НИ), в частности внутрилабораторной неопределенности (uRw), с использованием внутреннего контроля качества (ВнуКК) играет фундаментальную роль в поддержании APC, и многие усилия были предприняты и предпринимаются для улучшения ВнуКК, включая интеграцию традиционных программ контроля качества в режиме реального времени на базе проб пациентов. Однако мало внимания уделялось внутрилотовой и межлотовой вариациям, которые могут значительно повлиять на аналитическую и клиническую надежность лабораторных результатов. В этом выпуске журнала в двух статьях содержится новая и важная информация для специалистов клинических лабораторий по вопросу о различиях результатов измерений разными лотами реагентов.

АКТУАЛЬНОСТЬ Появление и совершенствование технологии высокопроцессивного секвенирования нового поколения (NGS) привело к снижению стоимости и времени, необходимых для проведения молекулярно-генетических исследований генома человека. Доступность и эффективность NGS создали предпосылки для масштабного использования данной технологии в государственных программах массового скрининга наследственно обусловленных заболеваний. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Разработка алгоритма неонатального скрининга новорожденных на муковисцидоз, фенилкетонурию и галактоземию с включением технологии высокопроизводительного секвенирования (NGS). МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ В исследование включены 196 217 новорожденных, обследованных в рамках существующего алгоритма неонатального скрининга в период с 01.01.15 по 01.01.18. Материалом для исследования были сухие пятна капиллярной крови. Биохимические маркеры в рамках существующего алгоритма скрининга определяли иммунофлуоресцентным, флуориметрическим или флуоресцентным методами. Для определения широкого спектра мутаций в генах CFTR (442 мутации), PAH (99 мутаций), GALT (40 мутаций) методом таргетного секвенирования использовали специально разработанную панель VariFindTM Neoscreen assay (Parseq Lab, Россия). РЕЗУЛЬТАТЫ Исследование ДНК методом NGS было успешно проведено в трех группах новорожденных (n=858) с повышенными результатами неонатального скрининга на муковисцидоз, фенилкетонурию и галактоземию. Молекулярно-генетический диагноз был установлен у 8% (69 из 858) обследованных, из них в группе с подозрением на муковисцидоз — у 12% (32 из 264), на фенилкетонурию — у 43,75% (35 из 80), на галактоземию — у 0,4% (2 из 514). Все обнаруженные мутации были проверены с помощью метода секвенирования по Сэнгеру. У остальных 92% (789 из 858) обследованных результаты биохимического неонатального скрининга оказались ложноположительными. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Анализ результатов протокола скрининга с использованием NGS продемонстрировал 100% чувствительность, специфичность и положительную прогностическую ценность. Полученные данные свидетельствуют о том, что таргетная панель полезна в качестве быстрого, высокопроизводительного и экономичного инструмента для одновременного анализа нескольких генов в неонатальном скрининге моногенных заболеваний. На основании полученных данных предложенный алгоритм был внедрен в программу неонатального скрининга Санкт-Петербурга.

Слюна не имеет в своем составе ряда транспортных белков, представленных в крови. Гормоны и факторы роста, в том числе инсулиноподобный фактор роста 1 (ИФР-1), в слюне находятся в свободном состоянии в той форме, в которой они участвуют в эндокринной регуляции. Они поступают в слюну в эквивалентных количествах по отношению к их содержанию в крови. Изменения уровня гормонов и факторов роста, циркулирующих в кровотоке, отражаются и на их содержании в слюне. В настоящее время, согласно клиническим рекомендациям Российской ассоциации эндокринологов по акромегалии, задержке роста у детей, определение содержания ИФР-1 в крови является обязательным (уровень доказательности 2, класс рекомендаций В). Определение ИФР-1 в слюне могло бы охарактеризовать состояние системы «соматотропный гормон — ИФР-1» в плане диагностики и контроля лечения низкорослости и акромегалии, позволило бы также оценить биологический возраст, риск саркопении, регенераторный потенциал человека, риск злокачественных заболеваний. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Изучение взаимосвязи уровней ИФР-1 в слюне и в сыворотке крови у практически здоровых людей. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ В исследование включены 14 практически здоровых добровольцев (7 мужчин и 7 женщин, возраст 41,9±3,8 года). В сыворотке крови и слюне определили уровень ИФР-1 (ИФР-1 ELISA, Human Insulin-like Growth Factor I, IGFBP-blocked, Mediagnost). В слюне определили содержание альбумина (реакция с бромкрезоловым зеленым). Рассчитали соотношение ИФР-1/альбумин в слюне. РЕЗУЛЬТАТЫ Уровень ИФР-1 (Me [Q1—Q3]) в сыворотке крови составил соответственно 158,0 [144,1; 181,2] нг/мл, в слюне — 1,9 [1,7; 2,2] нг/мл. Уровень альбумина в слюне составил 0,33 [0,29; 0,46] г/л, соотношение ИФР-1 и альбумина в слюне — 5,5 [4,5; 6,8] мг/г . ВЫВОДЫ Результаты проведенного исследования демонстрируют возможность использования определения ИФР-1 в слюне. Необходимо продолжить исследования для определения уровня ИФР-1 в различных возрастных группах, а также при различных заболеваниях.

Геном и функционирование митохондрий играют центральную роль в развитии, течении и исходе многочисленных заболеваний человека. Однако оценка функции митохондрий в клинической медицине затруднена, в первую очередь из-за инвазивного получения жизнеспособной ткани для биоэнергетического анализа и отсутствия адаптированных лабораторных технологий. В исследованиях последних лет сформулирована гипотеза, в соответствии с которой митохондрии легкодоступных циркулирующих клеток крови могут быть использованы в качестве биомаркера системной и/или клеточно-специфической биоэнергетической функции. В настоящем обзоре будут освещены методы оценки биоэнергетики клеток крови и клинические исследования, в которых эти методы применялись. Суммированы результаты оценки эффективности анализа биоэнергетического статуса у здоровых индивидуумов, а также динамики биоэнергетики клеток крови при заболеваниях и корреляции биоэнергетического статуса с клиническими параметрами. Обсуждаются пути внедрения биоэнергетического анализа клеток крови в поле трансляционных исследований и персонализированной медицины.

Клиницисты доверяют медицинским лабораториям предоставлять им надежные результаты, на которые они полагаются при принятии клинических решений. Лаборатории ответственны за точные и последовательные результаты с применением различных подходов, начиная от экспериментов по валидации и заканчивая ежедневными процедурами контроля качества. Все эти процедуры в разные моменты времени нацелены на проверку соответствия рабочих аналитических характеристик (APC) результатов определенного исследования аналитическим требованиям (APS), установленным для конкретного предполагаемого использования. APC можно частично определить путем оценки компонента неопределенности измерения в условиях внутрилабораторной неопределенности (uRw), который включает все компоненты случайных источников. Лаборатории, чтобы поддерживать адекватность своих процедур измерения, должны различать управляемые и неуправляемые аспекты. Одним из аспектов, которые могут повлиять на uRw, является кратковременная значительная погрешность, вызванная сдвигами в лотах реагентов и/или калибраторов; такая погрешность, будучи принятой или незамеченной, становится фактором APC. В этой статье мы предлагаем модель для отнесения части допустимой uRw к межлотовым вариациям, исходя из необходимости долгосрочного измерения для этой конкретной измеряемой величины. Данное отнесение управляет соотношением между краткосрочными и долгосрочными вариациями и указывает лабораториям, когда следует отклонять или корректировать определенные межлотовые вариации.

ВВЕДЕНИЕ В период пандемии COVID-19 популярность серологических исследований значительно увеличилась за счет широкого спектра возможного применения и высокой скорости выполнения анализа. Использование серологических методов диагностики позволяет проводить оценку гуморальной активности иммунной системы макроорганизма в ответ на инфицирование или вакцинацию. На текущий момент ответ иммунной системы на введение вакцины подвержен широким вариациям у людей различных возрастных, гендерных, медицинских и социальных групп, что требует дополнительного всестороннего подхода к изучению этих особенностей. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Оценить гендерно-возрастные особенности иммунного ответа при вакцинации и ревакцинации против новой коронавирусной инфекции у пациентов социальных учреждений длительного ухода. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Обследуемая группа из 8208 человек представляет собой пациентов в возрасте старше 18 лет, частично или полностью утративших способность к самообслуживанию и нуждающихся в постоянном постороннем уходе. Серологическое исследование сыворотки крови пациентов для количественного определения уровня антител IgG в международных единицах измерения (BAU/ml) выполняли с использованием теста VITROS Anti-SARS-CoV-2 IgG Quantitative в иммунодиагностических системах VITROS. РЕЗУЛЬТАТЫ После проведенной ревакцинации прирост среднего уровня титров антител IgG (СУТ АТ) у болевших и неболевших COVID-19 пациентов мужского пола составил 169,4 BAU/ml (15,4%) и 103,0 BAU/ml (14,8%) соответственно (p<0,05). У женщин прирост составил: в группе болевших — 212,2 BAU/ml (17,2%), в группе неболевших — 158,8 BAU/ml (18,5%) (p<0,05). Анализ возрастных особенностей изменения СУТ АТ показал наиболее выраженный прирост у пациентов возрастной когорты 18—25 лет. После проведенной ревакцинации установлено сохранение особенности роста СУТ АТ с увеличением возраста, при этом с характерным наличием тенденции к уравниванию СУТ АТ в разных возрастных когортах относительно периода до ревакцинации во всех исследуемых группах, независимо от гендерной принадлежности и перенесенного ранее заболевания. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Независимо от перенесенного ранее COVID-19, у женщин реализуется более выраженный иммунный ответ на двухэтапную вакцинацию. При этом пациенты в возрасте от 18 до 25 лет обладают наиболее выраженным гуморальным ответом на всех этапах вакцинации.

Увеличение числа людей старших возрастных групп на планете является глобальным демографическим трендом. Это делает актуальной проблему возрастассоциированной патологии, в том числе с точки зрения оценки стоматологического здоровья. Цель обзора — обобщить данные современной литературы по возрастзависимым лабораторным параметрам смешанной слюны (ротовой жидкости, РЖ) и выделить потенциальные саливарные биомаркеры старения. Источником первичной информации по маркерам РЖ служили медицинские библиографические базы данных PubMed и Scopus, из которых по ключевым словам было отобрано 39 полнотекстовых статей, из них 19 научных описательных обзоров, 20 оригинальных статей, в том числе 3 — это результаты многоцентрового и крупных когортных исследований, за 2017—2022 гг. Целый ряд авторитетных обзоров показывают взаимосвязь количества зубов, зубных протезов и прикуса со здоровьем и долголетием. Поэтому меняется отношение к концепции гигиены полости рта и лечению стоматологических заболеваний в пожилом и старческом возрасте. Неотъемлемой частью формирующихся новых подходов к оценке геронтостоматологических синдромов является разработка алгоритма их лабораторной диагностики. В настоящее время предложено много теорий и признаков старения. Среди них различные авторы считают наиболее важными интегративные признаки — клеточное старение, истощение пула стволовых клеток, нарушения межклеточной коммуникации. Поэтому поиск потенциальных саливарных биомаркеров старения был сосредоточен на группе лабораторных показателей, характеризующих именно эти признаки. Среди рассматриваемых в обзоре параметров на сегодняшний день наименее разработана оценка пула стволовых клеток по результатам исследования смешанной слюны. Для оценки клеточного старения и нарушения межклеточных коммуникаций наиболее актуальными могут считаться саливарные параметры — β-галактозидаза, связанная со старением, IL-6 и фактор некроза опухоли альфа (TNFα). Особая ценность такого подхода связана с тем, что получение РЖ является наименее травматичным и наиболее безопасным способом взятия биоматериала, содержащего ценную клинико-лабораторную информацию. Однако внедрение этих параметров в геронтостоматологическую практику для мониторирования качества старения требует проведения массовых исследований с целью оценки их клинической ценности.