In vitro Anti-Leishmanial Activity of Essential Oils Extracted from Plants Growing in Northern Cyprus Against Leishmania tropica

Abstract
Natural plant products are considered as a source of novel and effective compounds for the treatment of leishmaniasis. In this study, the in vitro activities of essential oils obtained from Origanum dubium (OD), Origanum majorana (OM), Salvia fruticosa (SF) and Laurus nobilis (LN) plants in Northern Cyprus were investigated against Leishmania tropica. Leishmania tropica strain (MHOM/TR/2012/CBCL-LT) was obtained. RPMI-1640 was added to 96-well plates in 100 μL aliquots, 100 μg/mL essential oil was added to the first well of each row and serial 2-fold dilutions were performed. A promastigote suspension was pipetted into all wells, and the plates were incubated. The promastigotes were enumerated using a haemocytometer. OD essential oil was effective at killing all promastigotes at a minimum inhibitor height (MIC)=0.2 μg/mL and had high activity at the lowest concentrations. Both SF and LN oils had MIC=1.56 μg/mL and LD50=0.78 μg/mL. SF was observed to impair promastigote morphology at the lowest concentrations, while LN did not exert any effect at concentrations <0.2 μg/mL. OM essential oil was found to have a MIC=3.13 μg/mL and a LD50=1.56 μg/mL. All tested essential oils inhibited promastigotes of Leishmania tropica. OD essential oil demonstrated the highest anti-leishmanial activity. Bitkilerden elde edilen doğal ürünlerin leishmaniasis tedavisi için yeni ve etkili bileşiklerin üretilmesine öncülük edeceği düşünülmektedir. Çalışmamızda, Kuzey Kıbrıs’ta yetişen Origanum dubium (OD), Origanum majorana (OM), Salvia fruticosa (SF) ve Laurus nobilis (LN) bitkilerinden elde edilen uçucu yağların Leishmania tropica’ya karşı in vitro etkinlikleri araştırılmıştır. Çalışmamızda, Leishmania tropica suşu (MHOM/TR/2012/CBCL-LT) kullanıldı. Düz tabanlı 96’lık plaklarda, tüm kuyucuklara 100 μL RPMI-1640 ve ilk kuyucuklara 100 μg/mL uçucu yağlar eklenerek, seri dilüsyonları yapıldı. Ardından tüm kuyucuklara Leishmania tropica promastigot süspansiyonundan pipetlendi ve inkübe edildi. Hemositometre yöntemiyle promastigotların sayısı incelendi. OD yağının minimum inhibitör konsantrasyonu (MİK)=0,2 μg/mL’de tüm promastigotları öldürürken, en düşük konsantrasyonlarda bile etkili olduğu görülmüştür. SF ve LN uçucu yağlarının ikisinde de MİK=1,56 μg/mL, LD50=0,78 μg/mL olarak saptanmıştır. SF’nin en düşük konsantrasyonlarının bile promastigot morfolojisini bozduğu görülürken, Laurus nobilis’in ise 0,2 μg/mL’den sonraki konsantrasyonlarda etkisini kaybettiği belirlenmiştir. OM uçucu yağının MİK=3,13 μg/mL, LD50=1,56 μg/mL olduğu görülmüştür. Kullanılan tüm uçucu yağların Leishmania tropica promastigotlarını inhibe ettiği görülürken, en yüksek anti-leishmanial etkinlik Origanum dubium uçucu yağında bulunmuştur.